服務熱線:
010-82909392
技術文章
首頁 > 技術中心 > 免疫熒光法的注意事項

免疫熒光法的注意事項

發布時間:2020/3/11 點擊量:184

免疫熒光法的注意事項

    免疫熒光技術又稱熒光抗體技術,是標記免疫技術中發展zui早的一種。它是在免疫學、生物化學和顯微鏡技術的基礎上建立起來的一項技術。
    免疫熒光技術按原理可分為直接法和間接法。所謂直接法就是將標記的特異性熒光抗體,直接加在抗原標本上,經過一定的溫度和時間的染色,用水洗去未參加反應的多餘熒光抗體,室溫下幹燥後封片、鏡檢。
    那麽在進行直接免疫熒光法的操作時,有哪些是需要红杏视频永久域名hxsp注意的呢?
    1.對熒光標記的抗體的稀釋,要保證抗體的蛋白有一定的濃度,一般稀釋度不應超過1:20,抗體濃度過低,會導致產生的熒光過弱,影響觀察的結果;
    2.染色的溫度和時間需要根據各種不同的標本及抗原的變化,染色時間可以從10min到數小時,一般30min已足夠。染色溫度多采用室溫(25°C左右),高於37°C可加強染色效果,但對不耐熱的抗原(如流行性乙型腦炎病毒)可采用0-2°C的低溫,延長染色時間。低溫染色過夜較37°C30min效果好的多;
    3.為了保證熒光染色的正確性,首次試驗時需設置下述對照,以排除某些非特異性熒光染色的幹擾。
    1)標本自發熒光對照:標本加1-2滴0.01mol/L,pH7.4的PBS;
    2)特異性對照(抑製試驗):標本加未標記的特異性抗體,再加熒光標記的特異性抗體;
    3)陽性對照:已知的陽性標本加熒光標記的特異性抗體。
    如果標本自發熒光對照和特異性對照呈無熒光或弱熒光,陽性對照和待檢標本呈強熒光,則為特異性陽性染色。
    4.一般標本在高壓汞燈下照射超過3min,就有熒光減弱現象,經熒光染色的標本zui好在當天觀察,隨著時間的延長,熒光強度會逐漸下降。
    間接法就是在檢查位置抗原時,先用已知未標記的特異抗體(di一抗體)與抗原標本進行反應,用水洗去未反應的抗體,再用標記的抗體(第二抗體)與抗原標本反應,使之形成抗原-抗體-抗體複合物,再用水洗去未反應的標記抗體,幹燥、封片後鏡檢。如果檢查位置抗體,則表明抗原標本是已知的,待檢血清為di一抗體,其他步驟的抗原檢查相同。
    標記的抗體是抗球蛋白抗體,同於血清球蛋白有種的特異性,如免疫抗雞血球蛋白隻對雞的球蛋白發生反應,因此,製備標記抗體適用於雞任何抗原的診斷。
    操作間接免疫熒光法時红杏视频app 安卓版應注意以下幾點:
    1.熒光染色後一般在1h內完成觀察,或於4°C保存4h,時間過長,會使熒光減弱;
    2.每次試驗時,需設置以下三種對照:
    1)陽性對照:陽性血清+熒光標記物
    2)陰性對照:陰性血清+熒光標記物
    3)熒光標記物對照:PBS+熒光標記物
    3.已知抗原標本片需在操作的各個步驟中,始終保持濕潤,避免幹燥;
    4.所滴加的待檢抗體標本或熒光標記物,應始終保持在已知抗原標本片上,避免因放置不平使液體流失,從而造成非特異性熒光染色。

北京红杏中文免费视频网站科技有限公司

傳真:010-82909811

郵箱:13910820560@163.com

地址:北京市海澱區悅秀路99號4層1單元402-1

版權所有 ©北京红杏视频app 安卓版科技有限公司   備案號:京ICP備11009704號-1  管理登陸  技術支持:化工儀器網  GoogleSitemap

在線客服 聯係方式 二維碼

服務熱線

13910820560

掃一掃,關注红杏视频app 安卓版

京公網安備 11010802031223號